混合物中的分子分离对于化学和生物学的许多工作流程至关重要,从分离和纯化生物制药到分析食品样品。可能需要分离来去除污染物,分离物种以进行鉴定或定量,或纯化目标分析物。然而,实现这一目标的具体方式将取决于样品中分析物的特性以及如何利用这些特性来实现分离。离子色谱法(IC)就是这样一种技术。
离子色谱是液相色谱的一种形式,用于分离带电物种,如离子和极性分子。分离是根据电荷进行的。
诸如蛋白质等分子具有独特的三维结构,其表面有可电离的基团。在任何给定的pH值下,表面净电荷对分子来说是独特的,影响保留时间,从而影响分离。
这种分离模式是基于流动相中的样品离子与固定相上带相反电荷的键基之间的交换过程。因此,色谱柱可以是阴离子交换柱(带正电荷的功能团)或阳离子交换柱(带负电荷的功能团)。
强阴离子交换器(如:季胺盐)/强阳离子交换器(如:磺酸),在较宽的pH值范围内保持其离子交换能力。
弱阴离子交换剂(如初级、二级或三级胺)/弱阳离子交换剂(如羧酸),在狭窄的pH范围内有效。
离子交换使用最初含有低盐浓度的流动相缓冲剂,以允许分析物结合。然后用不断增加的盐分梯度或pH值变化来从柱子上洗脱分析物。
电导检测是IEX最常用的方法,但也可以使用安培法、紫外线、离子排阻色谱法(IEC)该方法由Wheaton和Bauman在1953年提出,IEC是一种经常用于分析糖类、酒精和有机酸的IC,因此在发酵分析等领域很有用。>
4、离子对色谱法(IPC)IPC特别适用于分离极性有机酸、碱和齐聚物以及无机离子。>
同样与IEX不同,离子对分离的选择性主要由流动相决定。离子配对试剂有一个疏水的尾部和极性的头部,很像肥皂,因此它被称为「肥皂色谱法」。>
离子配对模型也被称为分配模型--分析物离子和离子配对试剂离子之间的相互作用被认为发生在流动相中。然后非极性分子可以吸附在疏水性的固定相上。>
5、一种越来越受欢迎的技术虽然传统上IC被用于阴离子、阳离子和碳水化合物,但新的分析挑战和关注的化合物的出现,使人们对这种技术在新领域的兴趣越来越大。
将IC与质谱(MS)结合在一起,可以提高灵敏度分辨率和从样品中获得信息。例如,在代谢组学中,IC可以分析离子和高极性代谢物,或者其他技术,如色谱-质谱(LC-MS)和亲水作用色谱(HILIC)不能达到所需的精度。
当与电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)配对时,IC-ICP-MS已经发现了实用性或金属的规格化。
液体和固体可以用Combustion IC分析,包括具有挑战性的样品,如塑料和石油。